CAR-T,全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy,嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。这是一个出现了很多年,但是近几年才被改良使用到临床上的新型细胞疗法。在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效,被认为是很有前景的肿瘤治疗方式之一。
嵌合抗原受体T细胞在培养操作过程中,遇到的较为常见的问题是:支原体感染。 如何解决支原体感染的问题?如何有效预防支原体感染?是每个生物企业需要不同程度重视的问题。
细胞培养的环境要求都是无菌的,然而在细胞培养的过程中也难免会感染,特别是支原体的感染。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明,95%以上是以下四种支原体:口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii),为牛源性。以上是常见的污染细胞培养的支原体菌群,但能够污染细胞的支原体种类是很多的,国外调查证明,大约有二十多种支原体能污染细胞,有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。
支原体介于细菌和病毒之间,可在无生命培养基中生长繁殖的zui小原核细胞型微生物,形态结构类似于细菌,但比细菌要小的多,且没有细胞壁。支原体具有结构简单、个体微小的特点,其形态多呈分支状或丝状,能通过微孔滤膜过滤器。
支原体在宿主细胞内的寄生,依赖于上皮细胞系,并且能存活时间较长,同时寄生于宿主细胞内可以逃脱宿主细胞的免疫系统,保护支原体对抗生素产生抗药性,这也是污染细胞的支原体难以清除的重要原因。
支原体的污染来源:
(1)细胞之间交叉污染;
(2)细胞培养操作人员的口腔、皮肤等;
(3)工作环境或实验器材的污染;
(4)培养基的污染。
那么,预防细胞支原体污染成为比较突出的问题,首先要考虑细胞房定期彻底全面的消毒杀灭支原体,才有降低环境和器材支原体污染细胞培养物的概率。过氧化氢空间消毒逐渐成为熏蒸消毒的新秀,因为安全、有效、快速无残留的特点,广泛被细胞房使用。
细胞培养需要哪些仪器和耗材支撑呢
1. 细胞培养,按产品主要可以分为:实验耗材和设备
2.细胞培养,按消耗品可以分为:血清、培养基和试剂,其中培养基包括无血清培养基、经典培养基和盐、干细胞培养基、特殊培养基、化学成分确定的培养基和其他培养基。
血清包括:胎牛血清 (FBS)、成年牛血清 (ABS) 和其他动物血清。
生物试剂主要包括:生长因子、补充剂、缓冲液、细胞解离试剂、平衡盐溶液、附着和基质因子、抗生素、抗真菌剂、检测试剂盒、冷冻保护剂和其他相关试剂。
3. 其他细胞培养耗材主要包括:滚瓶、摇瓶、培养瓶、培养板、培养皿等
4.细胞培养相关的配套设备主要有:过滤系统、细胞计数器、二氧化碳培养箱、离心机、高压灭菌器、显微镜、生物安全柜和其他配套设备,如移液器、移液器、细胞插入物、细胞刮刀、细胞升降器、细胞散布器、pH 计、振荡器、流式细胞仪、水浴锅、生物反应器、传统生物反应器、一次性生物反应器、微载体生物反应器、低温冰箱、超低温冰箱、低温冷藏箱、低温存储箱、液氮罐等。
5. 细胞培养的主要应用领域包括:生物制药、单克隆抗体、抗体生产、蛋白质开发、分子诊断、药物筛选、新药研发、组织工程、细胞工程、基因工程等。
于很多生物研究者来说,培养细胞重要的一点是,在培养的过程中一定要注意细胞的污染,一般来说,细胞污染不可避免,但可以减少其发生的频率和后果的严重性,所以在培养细胞的过程中一定要注意细胞培养的环境监测、清洁和消杀。
细胞培养生产过程中如何预防细胞污染呢
一)细胞房环境控制
环境要求:
洁净区10000级,局部100级,定期进行沉降菌检测
环境消毒:每周一次定期消毒灭菌
1) 地面/墙面:诺福消毒液、84消毒液交叉使用
2) 环境消毒:定期紫外照射,臭氧熏蒸,定期过氧化氢灭菌
3) 仪器设备表面:75%酒精擦拭
细胞房环境整体消毒哪种方式好?
气溶胶电动喷雾,这种要人工现场操作,费时费力,还要忍受现场消毒剂的刺激气味,对人员伤害不少,如果操作不当还有可能损坏腐蚀其他仪器设备。
甲醛熏蒸,此方式的作用效果强,但毒性大,一级致癌物质,对人体伤害的严重性难以评估,还会有残留物,花费很多人力清除残留。现在很少使用这种落后的消杀方式。
紫外灯消毒,紫外灯算不上是整体消毒,只能是局部的有限范围的消毒,单单依靠紫外线是很有限的,还要结合其它的消杀方式一起使用。
臭氧熏蒸,臭氧一般是作为日期消毒,监测浓度来说明效果也只是做个样子而已,其实并不能达到灭菌级别,臭氧很不稳定,难以在各个部位维持足够时间的浓度,而且臭氧有很大的氧化性,对橡胶、地坪、彩钢板和精密仪器都有损害。
过氧化氢VHP灭菌,细胞房过氧化氢空间灭菌是比较流行的消杀方式,系现在的主流,但过氧化氢厂家品牌繁多,质量水平参差不齐,说白了就是不专ye又想摊上一块蛋糕,后面苦的是自己和细胞培养单位。
对于细胞培养这么专ye性的技术,对口的是专ye性的细胞房污染解决方案。润联钟成不得不推荐技术成熟而口碑赞不绝口的比林科汉过氧化氢干雾消毒机,其配合细胞房专用的比利时进口杀孢子剂,效果杠杠的,作用时间短,浓度低,无腐蚀性,无气味,安全无害,高效灭菌,干雾气体无孔不入。
通过文丘里空气动力原理将空间杀孢子剂(高纯过氧化氢)干雾化变成干雾气体弥散在细胞实验室里面,良好的扩散性分布到每一个角落,包括卫生死角、设备缝隙、各种平常无法清洁消毒达到的位置均可消毒,达到对整个细胞室进行熏蒸灭菌目的,杀灭支原体及其他微生物。zui为关键的是此方法既快速又安全,意外污染的应急处理环境大派用场,高效杀灭支原体、细菌、真菌、病毒,真正能起到防止支原体及其它微生物污染的效果。
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